附件五 毕业论文开题报告表 课题名称 β2 微球蛋白测定试剂盒的研究
课题类型
指导教师
学生姓名
学号
专业
开题报告内容：
一、
课题的背景与意义 β2 微球蛋白是瑞典学者 Berggard!lj 在 1968 年首先从可致肾小管蛋白尿的 Wilson’S病和慢性镉中毒等患者的 24 小时尿中分离发现。是分子量为 11815Da 的血清蛋白质，其分子内含一对二硫键，不含糖，血清蛋白电泳位于 B2 区域；随后的研究揭示 p2 一微球蛋白的一级结构和 IgG 的重链和轻链有很大的相似性，尤其是和 IgCryl 链的 CH3 区域具有突出的相似性之后了解到淋巴细胞、血小板、多形核白细胞等均能合成．微球蛋白而且人体内几乎所有的有核细胞均能合成β2 微球蛋白，但是主要由淋巴细胞合成列。微球蛋白广泛存在于人血清、脑脊液、尿液、初乳、唾液等体液中，而且含量微小β2 微球蛋白的合成较稳定，正常情况下其平均生成速率估计为 2．4mg／kg／da，微球蛋白的代谢仅依赖于肾脏，由细胞表面脱落或释放入血的陡一微球蛋白，从肾小球自由滤过，99．9％在近端肾小管重新收并分解代谢，不再反流入血，因而在正常情况下血清β2 微球蛋白保持着稳定水平。正常人群血清β2．微球蛋白参考值范围为 0-3mg／L。
β2 微球蛋白分子量小，因而能够从肾小球自由地滤过，而且β2 微球蛋白除了由肾脏排泄外极少有肾外的分解代谢，其在体内的产生速率恒定，年龄、性别、机体肌肉组织不会影响其血清水平含量。在体内盼微球蛋白生成不增加的情况下，血清β2 微球蛋白水平升高是反映肾小球滤过功能损伤的极灵敏指标，而且比血清尿素氮、肌酐对肾小球滤过的评价更敏感，血清β2 一微球蛋白水平升高，然而尿β2 微球蛋白水平保持正常，这是由于肾脏肾小球的滤过功能损伤所致，常常见于急性、慢性肾炎、肾功能衰竭等…、。近端肾小管是β2一微球蛋白在体内处理的唯一场所，尿β2 微球蛋白是评价近端肾小管功能的特异指标，当近端肾小管轻度受损时，尿β2 微球蛋白会明显增加，能够准确反映近端肾小管损伤的程度。血清陀．微球蛋白正常而尿β2 微球蛋白升高常见于先天性近曲小管功能缺陷、范科尼综合征、急性肾小管坏死、肾小管间质损伤、Wilson"s 病等。
在临床常用的肾功能检测指标中，尿素和肌酐因测定简单方便而且价廉从而被广泛使用，然而这两个检测指标易受年龄、性别、肌肉组织含量和蛋白质摄入等因素的影响，其对肾功能的评估存在着不准确性影响临床医生对患者肾功能的准确判断。β2 微球蛋白因合成稳定，影响凶素少，可自由从肾小球滤过，在肾小管重新吸收并被分解代谢，因此β2 微球蛋白是诊断早期肾功能损伤的敏感指标，尤其对于糖尿病肾病、高血压肾病、红斑狼疮肾炎的早期诊断具有重要的临床应用价值。Kalansooriya A 等对肌酐<3．5 rag／retool 和肌酐在3,5-35rag／retool 水平的两组 2 型糖尿病病人和正常对照组测定血清肌酐和β2 微球蛋自发现，与正常人相比，2 型糖尿病病人的血清 82．微球蛋白水平在肌酐<3．5rag／retool 时就升高，在肌酐为 3．5．35mg／mmol 时显著升高，而且β2 微球蛋白检测方法简便可行，是监测糖尿病肾病发生的早期敏感血清指标。
此外，由于所有有核细胞均可产生陪微球蛋白，这也包括了肿瘤细胞，因此当机体发生肿
瘤时，由于肿瘤细胞合成β2 微球蛋白增加或其表面β2 微球蛋白释放增加或肿瘤致肾功能的减退，均可引起血清β2 微球蛋白水平的升高，因此在肾功能没有损害的情况下，血清β2 微球蛋白的变化常与肿瘤尤其是恶性肿瘤的发生以及其病理进程相关，鉴于此β2 微球蛋白可以作为肿瘤的血清标志物，可被临床用于多种恶性肿瘤的诊断、鉴别诊断、预后评价和复发监测，如恶性血液病、口腔肿瘤等。纵观近年来对β2 微球蛋白的基础研究，可见在骨代谢的过程中，隆微球蛋白是重要的调控因子，进而发现其在肿瘤的骨转移中发挥着重要作用。
此外，β2 微球蛋白对肿瘤的生物学行为亦有影响，这些影响包括介导肿瘤的免疫逃避以及调控肿瘤细胞的凋亡和肿瘤细胞有丝分裂的发生等。β2 微球蛋白是由 15 号染色体编码的小分子血清蛋白质，是主要组织相容性复合物(MHC)I 类分子的轻链即 p 链。通过非共价键β2 微球蛋白与 MHC I 类分子重链相结合而形成 Ig 样功能区，进一步构成 T 细胞受体四聚体。因该四聚体能够激活 CD8+细胞毒性 T 淋巴细胞，而 CD8+细胞毒性 T 淋巴细胞与肿瘤细胞的杀伤关联重大，因此β2 微球蛋白可能在肿瘤清除的免疫应答中发挥关键的调控作用。在恶变细胞表面对β2 微球蛋白的表达进行干预，重建机体对恶变细胞而非正常细胞的免疫清除能力的研究，是基因治疗肿瘤新的策略和新的研究热点由于血清中β2 微球蛋白含量微小，因此要求其测定方法需具备较高的分析灵敏度。最初 Berggard 等使用单向免疫扩散试验来进行体液中β2 微球蛋白的测定【l】’随后使用放射免疫分析法对β2 微球蛋白含量进行测定。此方法的敏感性、特异性均良好，并且与单向免疫扩散试验的结果具有良好的相关性，但是不足之处在于其存在放射性污染。此后，随着对β2 微球蛋白研究的深入和技术的改进，开始出现酶免疫抑制法和 ELISA 法。这两种方法的敏感性、特异性以及精密度均高，比放射免疫法优越，不需要复杂的设备，也容易实现自动化，最重要的是解决了试验人员接触放射性污染存在人身安全的问题。但是酶免疫抑制法和 ELISA 法的酶促反应易受外界因素的干扰，存在操作繁琐，重复性差，准备工作也多，手工操作费力费时，微孔清洗不完全而导致结果差错，抗原抗体结合物也可能不稳定等缺点 二、课题研究目的与内容 ：
研究目的：1．依据胶乳增强免疫比浊法的基本原理，研发出一种具有自我知识产权的β2．微球蛋白(BMG)检测试剂，为临床提供一种诊断性能好、具有价格优势的试剂。
2．应用研究的 p2 一微球蛋白检测试剂检测糖尿病患者血清β2-微球蛋白含量并评价其应用价值
研究内容：
1．将大小均一的胶乳和碳化二亚胺反应进行羧化，然后和商品抗体共价结合，得到免疫微球。观察免疫微球和 D2．微球蛋白的反应情况，确定制备 p2 一微球蛋白试剂的胶乳直径、碳化二亚胺用量、p2-微球蛋白抗体用量、搅拌时间及 PEG 浓度的最佳条件，建立自制试剂在日立 7600 分析系统下的最佳反应体系。并对成品试剂的批内、批间变异、线性范围、检出限、回收性能、抗干扰性、稳定性性能进行评价。
2．采集糖尿病病人(n=150)和健康对照者(n=65)静脉血和留取糖尿病病人 24d",时尿液以测定血清 p2 一微球蛋白、尿素、肌酐以及 24 小时尿蛋白含量，每一实验参与者的血清β2．微球蛋白均使用自研试剂和北京利德曼试剂进行测定，依据 24 小时尿蛋白结果对糖尿病病人进行分组，比较各实验组血清β2．微球蛋白、尿素、肌酐水平的差异，对糖尿病肾病患者血清β2．微球蛋白与尿素、肌酐、24 小时尿蛋白量进行相关性分析，并利用 ROC 曲线评价β2 微球蛋白诊断糖尿病肾病的效能，以探讨糖尿病患者血清β2 微球蛋白检测的临床意义。
三、 课题研究的思路 实验原理：相对应的抗原与抗体，在琼脂凝胶板上的相应孔内，分别向周 围自由扩散。在抗原与抗体孔之间，扩散的抗原与抗体相遇而发生特异性结合 反应，并于两者浓度比例合适处形成肉眼可见的白色沉淀线，证明有抗原和抗 体反应发生。若将待检抗体做系列倍比稀释，依据白色沉淀线的情况即可测定 抗体效价。
参考文献 【1】
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时间安排 工作内容 2017. 9.1—2017.9.18 查阅文献，论文定题 2017.9.18—2017.10.31 应用研究的β2-微球蛋白检测试剂检测糖尿病患者血清β2-微球蛋白含量记录数据 2017.11.1—2017.12.31 分析数据 2017.12.31—2018. 4 论文撰写与修改 2018. 5 论文答辩
指导教师意见：
指导教师签字：
年
月
日 注：课题类型**
1．A－毕业设计
B－毕业论文
2．X－校内题目
Y－校外题目
3．M—实习、N—实验、P—工程实践、Q—社会调查、R—作品设计、S—汇报演出、T—案例分析、O—其他形式 1、2、3 都要填 （ 2000－3000 字）
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