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1.1 材料
1.1.1 药品 黄芪药材（广东天泰药业有限公司中药饮片厂，批号：140803），经鉴定符合2010年版《中国药典》的要求。盐酸雷尼替丁胶囊（佛山手心制药有限公司，批号：1412602）。
1.1.2 试剂与仪器 分析纯冰醋酸（广东省光华化学厂有限公司）；SOD、MDA试剂盒（南京建成生物工程研究所）。游标卡尺（上海精密仪器仪表有限公司）；2-16PK高速冷冻离心机（德国Sigma公司）；DK-S22恒温水浴锅（上海精宏实验设备有限公司）；722分光光度计（上海光学仪器厂）。
1.1.3 动物 SPF级Wistar健康成年雄性大鼠48只，平均体重（200±20） g，由广州中医药大学实验动物中心提供，动物合格证号：SCXK（粤）2008-0002。实验动物中心SPF实验室条件严格控制，温度20～25℃，日温度差≤3℃，湿度40%～50%，空气清洁度10 000级，14 h黑暗，人工光照照明（8∶00～18∶00）。饲养期给予SPF鼠饲料，添加足量饲料，饮用蒸馏水。
1.2 方法
1.2.1 黄芪多糖的提取及含量测定 取黄芪，以10倍水量煎煮3次，过滤，取滤液，合并煎煮液，上X-5树脂柱，收集流出液并浓缩，加95%乙醇至乙醇占总重量的70%，离心后弃去上清液，沉淀用蒸馏水溶解，加液体体积4%的三氯乙酸，离心后取上清液，再次加95%乙醇至乙醇占总重量的70%，离心后取沉淀，按照95%乙醇→丙酮→乙醚的顺序洗涤，得黄芪多糖。采用苯酚-硫酸法测定其含量，以葡萄糖标准品，用紫外分光光度计于490 nm处测定其吸光度，测得其含量达41%[5]。
1.2.2 供试液制备 取黄芪多糖适量，用蒸馏水配成浓度为8、4、2 mg/mL的溶液，作为多糖供试液。取盐酸雷尼替丁胶囊，除去胶囊，内容物研磨后，加蒸馏水配成3 mg/mL混悬液。以上药液置冰箱低温保存备用。
1.2.3 动物分组与造模 大鼠完全随机分为6组：正常组，模型组，黄芪多糖高、中、低剂量组，阳性对照组（雷尼替丁组），每组各8只。除正常组外，其他大鼠参照文献[6]方法制备大鼠乙酸性溃疡模型。造模前大鼠禁食不禁水24 h，按3.5 mL/kg剂量，腹腔注射10%水合氯醛对大鼠进行麻醉，中上腹部备皮、消毒、铺洞巾，沿剑突下腹中线剪一个2.0 cm左右纵切口，暴露胃部，将浸有冰醋酸且直径5 mm的圆形滤纸贴于胃窦前壁浆膜面上，避开血管，接触30 s，连续2次。用棉签吸干冰醋酸，生理盐水冲洗腹腔，还纳鼠胃，逐层缝合切口、消毒；术后大鼠给予正常饮食。
1.2.4 给药 造模3 d后开始灌胃给药，10 mL/（kg·次），1次/d，连续给药2周。其中正常组、模型组给予生理盐水；黄芪多糖高、中、低剂量组分别给予浓度为8、4、2 mg/mL的黄芪多糖；雷尼替丁组给予浓度为3 mg/mL的盐酸雷尼替丁混悬液。
1.2.5 指标观察与测定 大鼠末次给药后，禁食不禁水24 h，乙醚麻醉，打开腹腔，腹主动脉取血4 mL，以转速3000 r/min，低温离心10 min，分离血清，按试剂盒方法，测定血清SOD活性及MDA水平。结扎贲门，取胃，沿胃大弯剪开，洗去胃内容物，展开于平板上，用游标卡尺测量每个溃疡的最大长径和最大宽径，将最大长径和最大宽径相乘作为胃溃疡面积（gastric ulcer area，GUA），如有多个溃疡，溃疡面积合并计算。
1.3 统计学方法
采用SPSS 13.0进行统计分析，正态分布计量资料以均数±标准差（x±s）表示，多组间比较采用方差分析，两两比较采用LSD-t检验。以P < 0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 各组大鼠GUA比较
与模型组比较，黄芪多糖高、中、低剂量组，雷尼替丁组的GUA显著缩小（P < 0.01）。与雷尼替丁组比较，黄芪多糖高剂量组的GUA缩小（P < 0.05），黄芪多糖中剂量组的GUA差异无统计学意义（P > 0.05）。与黄芪多糖低剂量组比较，黄芪多糖高、中剂量组及雷尼替丁组的GUA显著缩小（P < 0.01）。表明高剂量的黄芪多糖对大鼠乙酸性胃溃疡的疗效优于雷尼替丁，高、中剂量优于低剂量。见表1。
2.2 各组大鼠血清SOD活性及MDA含量比较
与正常组比较，模型组大鼠血清SOD活性显著降低（P < 0.01），MDA水平显著升高（P < 0.01）。与模型组比较，黄芪多糖高、中剂量组及雷尼替丁组SOD活性显著升高（P < 0.01或P < 0.05），而黄芪多糖高、中、低剂量组及雷尼替丁组MDA水平显著降低（P < 0.01或P < 0.05）。黄芪多糖高剂量组的SOD活性显著高于雷尼替丁组（P < 0.05），而MDA水平则显著低于雷尼替丁组（P < 0.05）。表明高、中剂量的黄芪多糖可提高乙酸性胃溃疡大鼠的抗氧化能力。见表2。
3 讨论
胃溃疡是临床常见的消化系统疾病，常反复发作，临床表现为嗳气、反酸、饥饿不适、中上腹胀闷、疼痛等，可发生出血、穿孔、幽门梗阻，甚至癌变等并发症。胃溃疡病因复杂，是综合因素的结果，它与遗传、精神、饮食、化学、感染、环境等因素相关。目前认为，胃溃疡的形成是胃黏膜的攻击因子与防御因子失衡所致[7]。攻击因子包括胃酸、胃蛋白酶、幽门螺杆菌、非甾体抗炎药等；防御因子包括胃黏膜、胃黏液、碳酸氢盐等。其中胃黏膜在防止胃溃疡的发生中起重要的作用。胃黏膜受化学刺激出现急性损伤时，可产生大量的氧自由基，对胃黏膜造成氧化损伤，促进胃溃疡发生[8]，因此氧自由基也是胃溃疡形成的重要攻击因子。氧自由基损伤胃黏膜的主要机制[9]：①破坏胃黏膜细胞膜系统；②与细胞RNA、DNA碱基交联，产生细胞毒作用；③破坏胃黏膜上皮间质的透明质酸和胶原纤维网。
SOD是体内抑制和防御自由基损伤的主要抗氧化酶，具有消除氧自由基、维持氧化与抗氧化系统平衡的作用，其活力反映了机体清除自由基的能力；因此，SOD可防止胃黏膜受氧化损伤，是胃黏膜的保护因子。胃黏膜受损时产生大量氧自由基，SOD活性下降，引发氧化应激系列反应，促使溃疡形成[10]。有研究发现，消化性溃疡患者胃黏膜中SOD活性比健康人显著降低[11]。MDA是氧自由基氧化过程中产生的脂质过氧化物，其水平间接反映了氧自由基对胃黏膜的损伤程度[12]。
随着H2-受体拮抗剂、质子泵抑制剂以及幽门螺杆菌根除方案在临床中的应用，大部分胃溃疡可达到近期治愈的效果，治愈率提高[13-15]。但溃疡愈合后容易复发，相关文献表明，30%～50%的溃疡病在治愈后一年内复发。甚至部分患者服用西药后病情并无明显改善。中药治疗消化性溃疡在远期疗效﹑预防复发、减少不良反应等方面具有较大优势[16-17]。胃溃疡属中医“胃脘痛”“嘈杂”“吞酸”等范畴，中医理论认为，本病多由感受外邪、饮食失节、情志内伤、劳倦过度等因素导致脾胃虚弱、肝胃不和、升降失常而致病。胃溃疡的病位在胃，与肝脾功能失调密切相关，临床多表现为虚实夹杂的证候[18-19]。脾胃虚弱是胃溃疡发生的根本，脾虚不仅是溃疡发病与转归的关键，也是溃疡愈合与复发的关键，故健脾益气法可提高溃疡愈合质量，以减少复发。研究发现，应用具有健脾益气温中作用的黄芪建中汤等方剂治疗消化性溃疡，复发率较西药组明显降低[16]。黄芪是黄芪建中汤的君药，具有补气健脾、托疮生肌、升阳举陷、利水消肿等功效，而黄芪多糖是黄芪的主要药效成分，本研究观察了黄芪多糖对大鼠实验性胃溃疡的疗效及对其抗氧化能力的影响。
大鼠乙酸性胃溃疡模型主要由冰乙酸灼伤胃局部组织，使胃黏膜的防御屏障受损，引起微循环障碍，该模型的胃溃疡形状、组织学特征及愈合和复发过程均类似人类慢性胃溃疡，广泛用于抗胃溃疡药物的研究[20-21]。本实验采用乙酸性胃溃疡模型，实验结果显示，模型组大鼠血清SOD活性较正常组显著降低，而血清MDA水平显著升高，表明乙酸灼伤过程中产生大量的氧自由基，使抗氧化酶SOD大量损耗，大鼠抗氧化损伤的能力降低，受氧化损伤的程度加重。实验观察显示，不同剂量的黄芪多糖均可显著缩小大鼠GUA，提高胃溃疡大鼠血清SOD活性，降低血清MDA水平，其效果尤以高剂量显著，其次为中剂量，低剂量较差。实验结果还显示，高剂量的黄芪多糖治疗胃溃疡效果及抗氧化损伤能力优于雷尼替丁。
综上所述，黄芪多糖可有效治疗大鼠乙酸性胃溃疡，以高剂量为佳。其机制可能与黄芪多糖提高机体的抗氧自由基损伤能力、促进胃黏膜修复有关，其更深入的机制有待进一步研究。
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（收稿日期：2015-02-25 本文编辑：李亚聪）
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