摘要 对金樱子黄酮醇提工艺进行研究，采用单因素试验考察提取时间、温度、料液比对黄酮提取率的影响。通过正交试验设计确定醇提法提取金樱子总黄酮的最佳提取条件，结果表明：时间为4 h，温度为50 ℃，乙醇浓度60%，料液比1∶20，在此条件下金樱子黄酮提取率可达4.855%。
关键词 金樱子；黄酮；醇提技术；优化
中图分类号 TS201.1 文献标识码 A 文章编号1007-5739（2012）10-0339-01
金樱子（Rosa laevigata Michx.）又名鸡头子、糖罐子等，为蔷薇科蔷薇属多年生野生植物，攀援状常绿灌木。果实中含有包括人体8种必需氨基酸在内的19种氨基酸及多糖、黄酮等生理活性物质[1]。随着学术界对黄酮与人类健康关系研究的深入，金樱子黄酮的研究受到空前重视。该文探究了具有成本低、污染少、易操作等优点的金樱子黄酮醇提法，旨在优化金樱子黄酮醇提技术，确定其最佳提取条件。
1 材料与方法
1.1 试验材料
1.1.1 仪器。UV-1240型分光光度计（日本岛津仪器设备有限公司），HH24数显恒温水浴锅（国华电器有限公司），数显恒温空气浴振荡器，GL220G2Ⅱ高速冷冻离心机（上海安亭科学仪器厂），FA1004电子天平（上海精科天平仪器有限公司），101AS22型不锈钢数显电热鼓风干燥箱（上海浦东跃欣科学仪器厂），高速中药粉碎机（广东佛山顺德良友机械厂）等。
1.1.2 试剂与原料。98%芦丁标准品（上海沪宇生物科技有限公司）；90%乙醇（长沙红星试剂有限公司）；其余浓度乙醇（自配）；金樱子成熟果实（采自娄底市万宝镇）。
1.2 试验方法
技术路线：金樱子→干燥→粉碎→脱脂→醇提→离心→离心液合并→定容测定吸光度。与标准曲线比较计算黄酮提取质量比。
1.2.1 标准曲线制备。准确称取芦丁标准品10 mg置于25 mL容量瓶中，加90%乙醇溶解，定容，准确吸取0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL分别置于10 mL容量瓶中；加10%亚硝酸钠0.1 mL，放置6 min；再加5%硝酸铝0.5 mL，放置6 min，加5%氢氧化钠4 mL，补纯净水至刻度，摇匀，静置6 min；以510 nm处测得的吸光度（Y）对浓度（x）作回归，绘制标准曲线。
1.2.2 样品测定。分别将待测黄酮各样品液定量稀释4倍后，再准确吸取各稀释液适量于10 mL容量瓶中，照标准曲线制定项下方法操作，测定吸收度，由回归方程求出稀释液中总黄酮浓度，然后计算百分含量[2-3]。
1.2.3 回流温度影响试验。取18份金樱子粉末，每份10 g，分别置于250 mL锥形瓶中，按固液比1∶20加入50%乙醇。平分为3组置于水浴温度20、30、40、50、60、70 ℃，转速为120 r/min的恒温水浴振荡器中浸提5 h，提取液过滤后按1.2.1方法测定并计算提取比例[4]。
1.2.4 浸提时间影响试验。取12份已干燥金樱子粉末，每份10 g，分别置于250 mL锥形瓶中，以固液比1∶20加入60%乙醇，平分为3组在温度50 ℃、转速为120 r/min的恒温空气浴振荡器中分别浸提2、3、4、5 h，提取液过滤后按1.2.1方法测定吸光度并计算提取比例。
1.2.5 固液比影响试验。取12份干燥金樱子粉末，每份5 g，分别置于250 mL锥形瓶中，平分为4组，分别按1∶10、1∶20、1∶30、1∶40加入60%乙醇，将其都置于温度50 ℃、120 r/min的恒温空气浴振荡器中浸提4 h，提取液过滤后按1.2.1方法测定吸光度并计算提取比例[5-6]。
1.2.6 正交试验。依据单因素试验结果，参考相关文献资料，利用正交试验表设计浸提温度、时间、料液比、乙醇浓度4种因素在3个水平对金樱子中黄酮类物质提取效果的影响试验。
2 结果与分析
2.1 标准曲线与回归方程
标准曲线如图1所示，回归方程：Y=0.010 1x-0.000 6，R2=0.999 6。在0~40 μg/mL的浓度范围内，芦丁浓度与吸光度有良好的线性关系。
2.2 回流温度的影响
在乙醇浓度50%、固液比1∶20，回流温度为20、30、40、50、60、70 ℃时，样品中黄酮提取比例依次为2.01%、2.64%、3.95%、3.88%、3.79%、3.46%，当温度从20 ℃升高至40 ℃时，提取率提高96.5%，此时温度继续升高时，提取液中的黄酮含量几乎不变甚至降低。因此，可以初步断定40 ℃左右时提取效果较好，温度过高可能破坏某些黄酮类化合物。
2.3 浸提时间影响
金樱子以固液比为1∶20、60%乙醇从中提取黄酮类物质，结果表明浸提3 h的提取效果达4.19%。往后随着时间增加，提取率不升反降，这可能与浸提时间太长有关，某些黄酮类化合物可能被破坏。
2.4 固液比影响
用60%乙醇在50 ℃空气浴振荡器中振荡浸提4 h，固液比1∶10、1∶20、1∶30、1∶40，测定提取比例，结果表明乙醇与金樱子比值越大，浸出率越高。
2.5 正交试验结果
正交试验结果如表1所示，处理8中黄酮提取比例最高，即50 ℃、料液比1∶20条件下，60%乙醇浸提4 h，黄酮提取量最大。对结果进行统计分析，表明浸提时间的极差R最大，所以浸提时间对金樱子黄酮类化合物提取效果影响最显著，浸提温度次之。
3 结论
试验结果表明，金樱子果实中黄酮的最佳提取条件为乙醇浓度60% ，提取温度50 ℃，浸提时间4 h，料液比1∶20，测得金樱子果实黄酮提取率为4.855%。
4 参考文献
[1]陈乃富，张莉，夏冠军.金樱子黄酮类化合物提取条件研究[J].中国林副特产，2006 （4）： 1-4.
[2]薛梅，王自军，闫豫君，等.金樱子中总黄酮和多糖的微波提取与含量测定[J].食品工业与科学，2005（10）：134-135.
[3] 李尼曼，钟晓红，李丽娜，等.金樱子黄酮类化合物提取工艺研究[J].湖南农业科学，2009（3）：79-82.
[4] 张曙明，顾志平.中药金樱子的研究应用概况[J].天然产物研究与开发，1996，8（4）：57-63.
[5] 薛梅，王鲁石，杜华，等.金樱子中总黄酮的提取及含量测定[J].现代中药研究与实践，2003，17（5）：16-17.
[6] 吴家红，彭小冰，席希晔.金樱子不同炮制品中总黄酮含量的测定[J].贵阳中医学院学报，2006，28（5）：60-62.
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